2017

Titulo

Sustitución de la electroforesis en gel de agarosa por nuevas tecnologías para evaluar la funcionalidad del ARN en los estudios moleculares

Autores

Carmen Alina Díaz Alonso , Heidys Garrote Santana , Vera Ruiz Moleón , Lesbia Fernández Martínez , Ana María Amor Vigil

Resumen


Introducción.La extracción y purificación de ARN es una práctica indispensable en los laboratorios de biología molecular (BM). La finalidad de estos procedimientos es la amplificación de oncogenes quiméricos.

Objetivos. Determinar si la cuantificación de la concentración y pureza del ARN es superior a la electroforesis en gel de agarosa para evaluar su funcionabilidad.  

Métodos. Se evaluaron 217 muestras de aspirado medular en el laboratorio de BM del IHI en el período comprendido entre febrero y diciembre del 2016. La cuantificación se realizó en un espectrofotómetro de volumen múltiple. Los datos se procesaron con el software Gen5TM. Se realizó lectura de densidad óptica a 260 y 280 nm ; la integridad del ARN se analizó mediante electroforesis horizontal en gel de agarosa.

Resultados. La concentración media del ARN extraído fue de 294.9 ng/µL y la pureza media fue de 2.2. EL 94% de los casos, presentó un patrón electroforético adecuado para proceder a la reverso transcripción. Diez muestras que presentaron una electroforesis no óptima, a pesar de poseer una concentración media de 28.3 ng/µL, tenían una pureza media de 2.18, por lo  que no fueron desechadas sino que basándonos en esta característica se logró obtener ADN complementario de manera satisfactoria y así completar el estudio en el 98.2 % de los pacientes.

Conclusiones. Con este trabajo se demuestra que la evaluación cuantitativa de la concentración y pureza del ARN es superior a la electroforesis en gel de agarosa para determinar la funcionalidad de este ácido nucleico, en los estudios de oncohematología.


Citas


  1. Díaz-Alonso Carmen, Garrote-Santana Heidys, Amor-Vigil Ana María, Suárez-González Yandi, González-Mugica Romero Raúl. Cuantificación de ácido ribonucleico para la realización de la técnica de RT- PCR. Rev Cubana Hematol Inmunol Hemoter  [Internet]. 2013  Sep [citado  2017  Mar  27];  29 (3): 298-303. Disponible en:

http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S086402892013000300010&lng=es.

  1. Hernández AK, Guzmán-Barney M. Comparación de métodos de extracción de RNA para la detección por RT-PCR del Potato yellow vein virus (PYVV) en diferentes órganos de Solanum tuberosum grupo phureja. Rev Colomb Biotecnol. 2013; 15(1):71-81.
  2. Cayuela JM, Mauté C, Fabre AL, Nibourel O, Dulucq S, Delabesse E et al. A novel method for room temperature distribution and conservation of RNA and DNA reference materials for guaranteeing performance of molecular diagnostics in onco-hematology: a GBMHM study. Clin Biochem. 2015 Apr 12. pii: S0009-9120(15)00128-9. doi:10.1016/j.clinbiochem.2015.04.004
  3. Li X, Nair N, Wang S, Wang L. Quality Control of RNA-Seq Experiments. Methods in Molecular Biology. 16 December 2014; 1269: 137- 46.
  4. Programa de control de calidad de muestras. Banco Nacional de ADN Carlos III. Universidad de Salamanca. www.bancoadn.org