Introducción: El Síndrome de Rett (SR) es un trastorno severo del neurodesarrollo que afecta principalmente a niñas con un patrón de herencia dominante ligado al cromosoma X. Constituye la segunda causa genética más común de discapacidad intelectual grave en el sexo femenino después del síndrome de Down y tiene una incidencia de 1:10000 recién nacidas vivas. La identificación del gen MECP2 ha hecho posible la confirmación molecular de numerosos casos con diagnóstico clínico y actualmente se conoce que alrededor del 90% de los mismos son explicados por mutaciones en este gen. Objetivos: Realizar la estandarización de la mutación R270X, para el diagnóstico molecular del SR. Métodos: Se procedió a la extracción del ADN de sangre periférica mediante el método de precipitación salina, se realizó la reacción en cadena de la polimerasa con los cebadores específicos y se digirió el fragmento amplificado con la enzima de restricción NlaIV, los resultados se visualizaron en gel de agarosa MS al 3%. Como control heterocigótico se empleó una muestra secuenciada en el laboratorio con el Sistema de Electroforesis Capilar GenomeLabTM GeXP. Resultados: Se logró la estandarización de la mutación debido a que la presencia de la misma provoca la pérdida de un sitio de restricción y se originan fragmentos de 38, 49, 80, 95, 176 y 187pb, sin embargo, cuando no está presente, se originan fragmentos de 38, 49, 80, 91, 95, 97 y 176pb. Conclusiones: El estudio permitirá realizar el diagnóstico molecular de la mutación R270X en pacientes diagnosticados clínicamente con SR en Cuba.