Introducción: La mucopolisacaridosis III (MPS III), o síndrome de Sanfilippo, es un desorden autosómico recesivo del metabolismo lisosomal. Esta entidad se clasifica en 4 subtipos (A-D). La MPS IIIB es causada por mutaciones en el gen NAGLU. Objetivos: Describir los hallazgos clínicos, bioquímicos y moleculares que permitieron el diagnóstico de un paciente con MPS IIIB. Materiales y Métodos: El diagnóstico fue realizado por hallazgos clínicos sugestivos de MPS, test químicos cualitativos en orina de primera micción y cromatografía en capa delgada (TLC) para MPS en orina de 24 horas. Se cuantificó la actividad de la enzima N- α-acetilglucosaminidasa. Se confirmó el diagnóstico por análisis de la mutación. Resultados y Discusión: Presentamos un niño varón de 4 años, con antecedentes prenatales de hipogastria y oligoamnio. Se presentó con peso y talla normal, discretas dismorfias faciales e infecciones respiratorias recurrentes, acompañándose de episodios severos de apnea de sueño por lo que requirió adenoamigdalectomía a los 2 años. Presenta conducta hiperactiva con signos de agresividad y bruxismo, asociado a discapacidad auditiva bilateral. En el test cualitativo se detecto  incremento de GAG en orina. La TLC mostró excreción de heparán sulfato en orina y la actividad de la enzima NAGLU en leucocitos estuvo deficiente El estudio molecular del gen NAGLU confirmó la presencia de dos mutaciones, una asociada a fenotipos severos (3G>A) y una variante alélica (Met1Ile), no descrita previamente. El estudio de portador en los padres sugirió el origen parental de cada variante encontrada. Conclusiones: Los hallazgos clínicos, bioquímicos y moleculares permitieron  el diagnóstico de un síndrome de Sanfilippo tipo B en este paciente. El estudio molecular confirmó la presencia de una nueva mutación asociada con este desorden.